一、肝素简介
肝素是一种含硫酸酯的酸性多糖，将它偶联到交联及活化的琼脂糖凝胶上，该填料具 有很高的物理化学稳定性。 肝素能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、 限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子结合，所以肝素琼脂糖凝胶可以用于这类物质 的纯化。 本产品稳定性好，基团脱落少，使用寿命长，使用方便，应用广泛。

二、 亲和介质的特性

三、 适用范围

肝素琼脂糖凝胶用于抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干扰素、核酸结合蛋白、限制内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物大分子的分离纯化。

实验名称：肝素琼脂糖凝胶 FF 分离凝血酶。实验步骤：

1、 肝素琼脂糖凝胶 FF 装柱，1.6′20m，柱床体积为 10ml

2、 用缓冲液 1 平衡 5 个床体积，流速为 2ml/min

3、 取活化后凝血酶粗品 200mg 溶解在 20ml 的缓冲液 1 中，用 0.45μm 的滤膜过滤， 上样，流速为 1ml/min

4、 用缓冲液 1 再洗 5-10 个床体积，流速为 2ml/min

5、 最后缓冲液 2 进行洗脱，流速为 2ml/min，收集洗脱峰，用 SDS-PAGE 纯化后的效果。

缓冲液组成：

缓冲液 1：100mM pH7.4 的 PB 缓冲液。配制：0.5M NaH₂PO₄ 38ml，0.5M Na₂HPO₄ 162ml，加适量水溶解后定容到 1000ml。

缓冲液 2：1：100mM pH7.4 的 PB 缓冲液。配制：0.5M NaH₂PO₄ 38ml，0.5M Na₂HPO₄ 162ml， 119 克 NaCl,加适量水溶解后定容到 1000ml。

四、 亲和介质应用注意事项

1、 该凝胶从冷室或冰箱中取出后最好在室温下缓慢振摇恢复到室温，然后再装柱，以免产生气泡影响柱效。

2、 吸附：20-50mM,pH7.4-8.0 的缓冲液，为避免离子交换的干扰，缓冲液中可以适当加50mM-100mM 的 NaCl,，最常用的为 Tris-HCl 缓冲液。

3、 洗脱：可以用 pH7.4-8.0 的缓冲液加 0.2-2M NaCl 进行阶段或者线性洗脱。

4、 上样：样品必须与平衡柱子的缓冲液的 pH、电导相同。

5、 不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。

6、 肝素琼脂糖凝胶 FF 亲和填料的再生处理方法：先用 0.1M Tris-HClpH7.0 缓冲液洗 3 个柱床体积，然后用 0.1M NaOH 含 2MNaCl 流洗 3 个床体积,最后用 20%乙醇洗 3 个床体积即可。长时间用酸碱洗填料会是填料的吸附能力下降，所以清洗要尽量缩短时间。

7、 该亲和填料保存条件为 20%乙醇，+4~8℃。