最新数据显示，2023年1月-11月，国内已有31家核酸药物公司获融资，总金额近40亿元，其中多家公司融资超1亿元，核酸药物领域炙手可热。（医麦客统计，文末附31家公司名单）

作为核酸药物的代表，小核酸药物凭借其对疾病遗传物靶点的直接作用，具有更高的靶向成药性，而且特异性高、药效长，表现出极大的潜力。这种独特的优势也使其成为研发和投资领域共同关注的焦点。

小核酸药物在合成过程后，会存在多种杂质，其中短核苷酸（n-x）或者长核苷酸（n+x）与目标产物性质非常接近，去除难度较大。如何在去除这些产品相关杂质的同时，又能保证较高的收率，对纯化工艺来讲是非常大的挑战。

本期文章，我们来了解一下可用于商业化生产的寡核苷酸纯化解决方案。

01  寡核苷酸基本概念

小核酸药物，英文Oligonucleotide drug，又名寡核苷酸药物，是由十几个到几十个核苷酸串联组成的短链核酸，通过干预靶基因表达，实现治疗疾病的目的。

狭义的小核酸药物是指siRNA（RNA小干扰药物）；广义的小核酸药物是指：除了siRNA外，也包括ASO（反义寡核苷酸药物）和miRNA靶向（微小RNA），saRNA（小激活RNA），以及Aptamer（RNA适配体）等。

目前全球的药物开发重点主要集中在siRNA和ASO。

02  寡核苷酸生产工艺

小核酸药物的生产，通常采用化学合成法，经过靶序列筛选、寡核苷酸合成、断裂和脱保护、纯化、分离等步骤。其中寡核苷酸的合成比较关键，目前市场上多采用亚磷酰胺化学固相合成法。化学修饰虽然可以提高药物稳定性，但同时也会带来杂质种类增加、纯化难度高的问题，为最终药品的质量和安全带来隐患。

在寡核苷酸的固相合成过程中，产生的杂质种类多样，包括寡聚物（短核苷酸N-x/长核苷酸N+x）、修饰反应的副产物、脱保基不完全产物、缺失嘌呤碱基的寡核苷酸以及其他降解产物等。想要获取高纯度、高质量的寡核苷酸，必须使用层析纯化去除这些杂质。

由于这些杂质与目标产物的在电荷、分子大小、疏水性能上极为相似，给寡核苷酸的纯化带来了一定的难度，需要用高分辨率的层析介质和层析工艺来完成杂质与目标产物分离的目的。

03  寡核苷酸纯化工艺

使用合适的高分辨率层析介质和层析工艺，可确保寡核苷酸的质量和生产效率。

纯化工艺方面，常见的寡核苷酸纯化方法是反向层析（RP）和阴离子交换层析（AEX），其中，我们更推荐阴离子交换层析（AEX），原因：一是避免了使用高成本含有机溶剂的洗脱液，无需配备防爆设备，还可减少废液处理的费用；二是原理简单，易于放大，可以有效地与带负电荷的寡核苷酸结合。

通常先利用一定浓度的盐去除无DMT保护的杂质，然后在柱上利用酸洗脱三苯甲基（Detritylation），最后利用不同的盐浓度把目的寡核苷酸分离纯化。纯化后的样品需要脱盐和浓缩（沉淀或TFF）。

04  层析介质的选择

PolyGel 15Q/30Q阴离子交换层析纯化寡核苷酸PolyGel 15Q 产品详情

科诺赛的PolyGelTM 15Q、PolyGelTM 30Q 是以聚合物PS-DVB（聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物）为基质的阴离子交换层析介质，具有15μm 和 30μm的小粒径，采用特殊的功能基团修饰方法，专为小核酸类药物的纯化量身打造，具有极高的分辨率、操作空间大、载量高，即使在变性条件（pH 12）下，依然可对寡核苷酸样品进行纯化，有效避免了单链自互补或富含GC寡核苷酸的聚集现象，特别适合寡核苷酸的精纯。

使用PolyGel 15Q 阴离子交换层析介质纯化寡核苷酸，经过一步纯化，纯度可达96%以上，回收率85%~90%，完全满足其质量要求。

备注：除了PolyGel 15Q，PolyGel 30Q 也是一款优选的寡核苷酸纯化填料，具体可根据需要纯化样品的分子大小、序列、电荷等方面来择优选择。

目前，高质量的寡核苷酸生产能力和稳定的供应链，在国内一直处于比较稀缺的状态。将寡核苷酸最终产物与其及为相似的杂质进行分离纯化，一直是制约寡核苷酸高质量、批量化生产的难点之一。

科诺赛生物作为国内纯化领域的后起之秀，迎难而上，结合自主创新的技术，深入研究，充分考虑产品纯度和回收率之前的平衡，通过不同批次的样品，以及不同规模下进行多次实验验证，可以做到在保证样品收率85%以上的同时，将其纯度做到95%以上，为客户提供高效的寡核苷酸纯化解决方案，帮助客户解决在生产制备过程中的难题。

PolyGel 15Q/30Q 产品一览http://www.chromsep.cn/productdetail-588show.html

产品特点

》15μm和30μm两种小粒径可供选择，分辨率高，载量高，操作空间大，满足寡核苷酸多样的纯化需求；

》以聚合物PS-DVB为基质，具有热稳定性和化学稳定性，可实现多种技术的应用；

》在高温下运行可以加快传质，提高长链寡核苷酸的分离度

》高pH等变性条件下不影响纯化，有效避免在修饰、自我互补和富含 GC 的寡核苷酸聚集；

》性能优良，容易放大，使用成本低，可满足从实验室到工业化生产不同规模的需求。

附录：2023年1-11月国内核酸药物领域融资情况