在纯化 His标签实验过程中，如何解决EDTA(螯合剂)和DTT(还原剂)的耐受问题，避免金属离子脱落？

His标签蛋白纯化通常采用固定化金属离子亲和层析（IMAC）纯化的方法，主要利用介质配体螯合的金属离子吸附纯化表面带组氨酸残基的蛋白。Ni2+、Co2+和Cu2+是His标签蛋白纯化中使用较为广泛的金属离子，因为它们在水溶液中与组氨酸具有较好的亲和性。其中，Ni2+是亲和纯化实验中最常使用的，Ni2+在琼脂糖上的螯合形式多样，不同的螯合结构，决定了Ni2+在层析介质上的稳定性和结合能力。传统的His标签蛋白纯化介质最常用两种配基：次氮基三乙酸(NTA)和亚氨基二乙酸（IDA），通常情况下都是比较稳定的。

在细胞培养，尤其是酵母、CHO、昆虫杆状病毒等真核分泌表达过程中，通常会加入EDTA和DTT，如果使用传统的His标签蛋白纯化介质，会导致金属离子有一定的脱落，所以在进行纯化 His标签实验之前，需要提前进行缓冲液的置换来去除EDTA或者DTT，过程繁冗复杂，而且会降低蛋白的活性。

为了解决EDTA和DTT的耐受问题，避免金属离子脱落，科诺赛生物研发生产出了新型His标签蛋白纯化层析介质产品：Ni-TED Chromrose?FF镍亲和层析介质，此产品强力的螯合配基TED与Ni2+形成5个螯合位点（和EDTA与Ni的螯合类似），使Ni2+异常稳定，其螯合后的蓝色也更深。

产品特点：

》最高耐受100mM EDTA和10mM DTT，无需进行样品前处理，简化实验流程，保护蛋白活性；

》螯合Ni2+离子非常牢固，几乎零脱落；

》清洗再生步骤简单，无需脱镍直接进行NaOH清洗；

》高动态结合载量28mgHis标签蛋白/mL介质。

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