蛋白纯化标签的发现是重组蛋白纯化技术的一个突破，蛋白质纯化标签来源多样，市场上已有多种用途广泛的蛋白融合标签，有的标签能促进靶蛋白溶解性增强，有的标签能从粗提的生物提取物中高效检测和纯化重组蛋白。其中His标签是目前重组蛋白纯化中使用最广泛的亲和纯化标签。

His标签-重组蛋白纯化的首选

His标签通常是由6~10个组氨酸残基构成，其本身的特性对目的蛋白没有影响，不会形成二聚体，分子量较小，只有0.84kDa，对重组蛋白的下游应用基本没有影响，一般情况下不需要切除；而且具有结合量高、成本低、高通用性、纯化条件温和、结合特异性高、多种上样条件可供选择等优势，在变性和非变性条件下均不影响重组蛋白的亲和纯化，是重组蛋白分离纯化的第一选择。

His标签蛋白纯化解决方案

在标签蛋白纯化过程中，合适的标签不但有利于蛋白的纯化，促进蛋白的可溶性，同时也不影响蛋白的结构功能和下游应用。His标签组氨酸上的N原子能够与某些过渡金属离子形成配位键，利用这一特性，可以使用含有金属离子配基的层析填料来捕获和纯化His标签重组蛋白。

目前，市场上的His标签纯化填料产品有很多，从填料的质量、性能、供应链等方面综合考量，Ni Chromrose镍离子层析填料系列性价比较高，有1mL至10L多种包装规格，可满足用户从条件筛选、实验室研究到商业化生产的多样化需求。

不同配体的Ni填料性能对比

1）Ni-IDA Chromrose 6FF / HC

Ni-IDA Chromrose 6FF / HC是由高度交联琼脂糖为基质，偶联IDA为配体，螯合镍离子（Ni2+）制备而成的层析介质，可以耐受最高0.3MPa的压力，更稳定，可在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。如果纯化的首选的是高产量而非纯度，此款产品是正确的选择。

2）Ni-NTA Chromrose 6FF / HC

Ni-NTA Chromrose 6FF / HC由高度交联琼脂糖为基质，偶联NTA为配体，螯合镍离子（Ni2+）制备而成的层析介质，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件，配体更稳定，耐受性强，镍离子不易脱落，适合对蛋白纯度要求较高的纯化。

3）Ni-TED Chromrose 6FF

Ni-TED Chromrose 6FF 可耐受100mM EDTA和10mM DTT, 在含有EDTA及DTT的情况下直接进行目的蛋白纯化，更适合捕获和纯化分泌到真核表达培养基上清中的His标签蛋白，此介质的清洗再生工作简单，无需脱镍直接进行 NaOH 清洗，实验效率高。

应用案例

》Ni-TED Chromrose 6FF纯化实验：

层析介质： Ni-TED Chromrose 6FF

样 品： 青霉素酶发酵液

实验设备： 1 mL Xtrap Ni-TED FF 镍凝胶柱、蛋白纯化仪

平衡缓冲液：0.2M NaCl，50mM Tris-HCl，0.1mM EDTA，PH7.4

淋洗缓冲液：0.2M NaCl，50mM Tris-HCl，0.1mM EDTA，30mM 咪唑，PH7.4

洗脱缓冲液：0.2M NaCl，50mM Tris-HCl，0.1mM EDTA，500mM咪唑，PH7.4

》Ni-TED Chromrose 6FF测试：

• 1 是国外知名品牌His纯化琼脂糖填料

• 2、3、4是国内某品牌His纯化琼脂糖填料

• 5 是 Ni-TED Chromrose 6FF

• 6~12 是国内品牌His纯化磁珠产品
  

  
  

图8数据表明，Ni-TED Chromrose 6FF在载量、纯化效果方面表现较为优秀。

综合来看，Chromrose 镍离子填料在纯化His标签蛋白的应用中效果很好，纯度与收率均有保证，可在His标签纯化中作为首选层析填料。

了解更多信息请关注科诺赛生物！