纯化利器 │ Crysto Shell 400&700助力小鼠腹水IgM抗体纯化
小鼠腹水免疫球蛋白M（IgM）型抗体，是将分泌IgM的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内诱导腹水产生，其高效价和早期免疫应答特性，使小鼠腹水IgM在基础研究和临床应用中具有独特价值。腹水中含有高浓度的目标抗体（可达5-10 mg/mL），同时混杂部分小鼠自身杂蛋白，需结合多种技术以去除杂蛋白，而科诺赛复合模式层析介质Crysto Shell 400/700将高效助力小鼠腹水IgM的纯化与制备。
01 IgM的基本结构与功能 IgM是分子量最大的免疫球蛋白（约900 kDa），占血清总免疫球蛋白的5%-10%，主要分布于血管内，以五聚体形式存在，由五个单体通过J链连接而成。 它在早期免疫应答中发挥着重要作用，能够高效结合抗原并激活补体途径，尤其在抗感染免疫中表现出强大的杀菌和凝集能力。 Figure 1：IgM抗体分子结构 02 纯化策略与原理 硫酸铵分级沉淀：可选择性富集IgM，适用于所有类型IgM。添加饱和硫酸铵至终浓度30%-35%，可沉淀白蛋白、部分IgG等杂蛋白，保留IgM在上清中。之后上清继续添加饱和硫酸铵至终浓度40%-45%，此为IgM溶解度最低区间，沉淀量可达峰值。 复合模式层析介质Crysto Shell 400/700：由活性配基内核和惰性壳层组成。壳层孔径小于核心孔径，可以排阻大分子如IgM，使之流穿，而分子量较小的杂质通过表层进入内核。内核部分被辛胺基团激活，通过阴离子交换+疏水相互作用双重功能吸附杂质，有效去除纯化体系中的宿主细胞蛋白、DNA片段、内毒素、白蛋白等。与传统的分子排阻层析相比，该核壳层析介质具有更高的上样量和流速，可显著提高生产率。 Figure 2：琼脂糖裸球显微镜成像图谱 Figure 3：Crysto Shell 400微球显微镜成像图谱 03 应用案例 1、实验材料 2.1 硫酸铵分级沉淀 1）腹水样品10000 x g、4℃离心15 min，去除细胞碎片等大颗粒杂质，0.45 μm过滤。 2）缓慢加入预冷饱和硫酸铵溶液至终浓度35%，4℃静置30 min。 3）10000 x g、4℃离心20 min。 4）沉淀-1用1 mL复合模式平衡液溶解，上清-1 0.45 μm过滤。 5）上清-1加⼊预冷饱和硫酸铵溶液⾄终浓度45%，4 ℃静置1 h。 6）10000 x g、4℃离心20 min。 7）沉淀-2（目标组分）用5 mL复合模式平衡液溶解，上清-2 0.45 μm过滤。 8）沉淀-1、沉淀-2、上清-2取样，还原/非还原SDS-PAGE检测纯度。 2.2 复合模式层析 1）目标组分测电导率为18 mS/cm左右，无需脱盐换液可直接上样，保留时间3-5min。 2）收集流穿样，超滤浓缩换液。 3）还原/非还原SDS-PAGE检测纯度。 Figure 4：小鼠腹水IgM纯化复合模式层析图谱 Figure 5：小鼠腹水IgM纯化各组分SDS-PAGE凝胶图谱 采用硫酸铵分级沉淀-Crysto Shell 400复合模式层析方案纯化小鼠腹水IgM，可提升目标分子纯度至>95%。若使用Crysto Shell 700，则可能去除更大分子量杂蛋白，进一步提升纯度。 04 注意事项 1、确保准确配制饱和硫酸铵溶液，否则梯度差异可能影响沉淀效果。 2、IgM等电点为6.0-7.0，而饱和硫酸铵溶液的pH通常为4.5-5.5，需调整溶液pH至中性，越接近IgM等电点，沉淀效果越好。 3、低温（4℃）沉淀和离心，避免蛋白聚集、降解或变性。 4、短时间沉淀（30 min-1 h）即可选择性捕获目标蛋白，长时间孵育（过夜）可能导致低溶解度杂蛋白或部分变性蛋白共沉淀，降低纯度。 5、复溶沉淀时，缓冲液体积可根据沉淀量自行调整，但不宜过大，避免样品稀释过度影响后续纯化时数据监测。 05 结语 通过硫酸铵分级沉淀法阶段性提高盐浓度可逐步去除大部分杂蛋白并富集目标蛋白，结合科诺赛复合模式层析介质Crysto Shell 400可实现小鼠腹水IgM的高效纯化。对于可能存在的分子量>400 kDa的杂蛋白，可考虑使用Crysto Shell 700替代。该工艺方案同样适用于重组表达IgM的纯化。 订货方式
